LOS ACEITES OZONIZADOS EN EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS
Ozonated oils in the treatment of infectious diseases
Resumen
El empleo de aceites ozonizados ha resultado eficaz en el tratamiento de numerosas enfermedades de origen infec- cioso. Sin embargo, aún se desconocen muchos aspectos de la interacción de estos agentes con los microorga- nismos y las células humanas. En el presente trabajo se revisan resultados relevantes obtenidos sobre la actividad antimicrobiana de los aceites ozonizados, así como sus aplicaciones en este campo, que han sido avaladas por ensayos preclínicos y clínicos. Se analizan las interacciones de los aceites ozonizados con los agentes infecciosos y se proponen mecanismos que justifican su acción y toxicidad selectiva. También se señalan las nuevas aplicacio- nes en estudio y las potencialidades que aún quedan por explotar para su uso en el control de las enfermedades infecciosas. Palabras clave: Aceites ozonizados, agentes antimicrobianos, defensa antioxidante, estrés oxidativo, especies reactivas del oxígeno.
Abstract
The use of ozonized oils has been effective in the treatment of numerous infectious diseases. However, many aspects concerned to the interaction of these agents with microorganisms and human cells remain still unknown. This paper reviews major key points on the antimicrobial activity of ozonated oils, and their applications in this field, which have been supported by preclinical and clinical trials. Interactions between ozonated oils and microorganisms are analyzed and mechanisms to justify their action and selective toxicity are proposed. New applications under study and potentialities that remain to be exploited for use in the control of infectious disease are also commented. Keywords: Ozonated oils, antimicrobial agents, antioxidant defense, reactive oxygen species.
Introducción
El empleo de aceites ozonizados ha resultado eficaz en el tratamiento de enfermedades virales, bacterianas, fúngi- cas y por protozoarios.1-4 La capacidad germicida que estos agentes manifiestan ha sido históricamente reconocida, sin embargo, a pesar de haber transcurrido poco más de un siglo desde sus primeras aplicaciones en el tratamiento de enfermedades infecciosas, el uso de los aceites ozoniza- dos y otros agentes oxidantes quimioterapéuticos relacio- nados no ha logrado abrirse paso como práctica eficaz y confiable en la mayoría de los países.5
Desde el punto de vista estructural, las células
*Escuela de Medicina, Universidad Cuauhtémoc, Plantel Aguas- calientes. Correspondencia: Vicente Curtiellas Piñol Escuela de Medicina, Universidad Cuauhtémoc. Ave Independencia
humanas poseen al igual que los microorganismos, un enorme número de moléculas y rutas metabólicas que pueden afectarse en presencia de los compuestos peroxí- dicos que poseen los aceites vegetales ozonizados. Par- tiendo de esta premisa, pudiera considerarse que estos agentes antimicrobianos no cumplen con el principio de la toxicidad selectiva. Sin embargo, los ensayos preclínicos, clínicos, y la práctica médica han demostrado la seguridad y eficacia de los aceites ozonizados en múltiples patolo- gías.5 Este trabajo se propone, a la luz de los resultados actuales en este campo, mostrar las bases que sustentan
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Curtiellas Piñol LOS ACEITES OZONIZADOS EN EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS
el empleo de estos agentes en el tratamiento de las enfer- medades infecciosas, sus aplicaciones en la práctica clí- nica y las perspectivas y potencialidades que aún quedan por explotar para su uso en el control de las enfermedades infecciosas.
Actividad antimicrobiana in vitro y mecanismo de acción de los aceites ozonizados Los aceites vegetales ozonizados han mostrado actividad in vitro frente a un gran número de especies de microorga- nismos. Los valores de concentraciones mínimas inhibito- rias de estos antimicrobianos, se encuentran en el rango de 0.1 mg/ml a 10 mg/ml, que resultan al menos cien veces superiores a los valores que usualmente poseen los anti- microbianos convencionales.6,7 Estos valores relativamente elevados se deben a que la actividad biológica corres- ponde sólo a una fracción de los compuestos presentes en los aceites ozonizados, así como a la polimerización que sufren algunos compuestos peroxídicos durante el proceso de ozonización.8 Entre las bacterias, los grupos más sensibles han resultado las micobacterias y los cocos grampositivos; mientras que entre los menos sensibles se encuentran los bacilos gramnegativos multirresistentes y los bacilos aerobios esporulados.6,7 Sobre dermatofitos, se ha demostrado actividad fungistática y fungicida a concen- traciones menores al 1% y 2%, respectivamente.9
El análisis químico de un aceite de girasol ozonizado mostró la presencia de estructuras derivadas de triglicéridos, que poseen grupos carbonilo, carboxilo o peróxido. Entre los compuestos peroxídicos se encuentran α-aciloxi-hidro- peróxidos, ozónidos, perácidos y α-hidroxihidroperóxidos,8 los cuales pueden ocasionar la oxidación de múltiples bio- moléculas presentes en los microorganismos. La existencia de un estado reductor en el interior celular, es un requisito necesario para el funcionamiento apropiado de los sistemas enzimáticos y de las membranas biológicas. Partiendo de ello, el efecto de los aceites ozonizados sobre los microor- ganismos puede ser explicado por dos mecanismos no excluyentes:
Mecanismo directo: dado por la acción de los compuestos peroxídicos y aldehídos sobre las proteínas sensibles a estos compuestos, entre las que destacan las metaloproteínas, las cuales son muy frecuentes entre las que poseen actividad enzimática. Entre los posibles daños a proteínas se encuentran: oxidación de grupos sulfhidrilo (SH), modificación de grupos prostéticos y la reacción de los aldehídos con los residuos amino de los aminoá- cidos. Todos estos cambios llevarían a la pérdida o disminución de la actividad biológica de un gran número de enzimas y proteínas estructurales, lo que sería incompatible con la viabilidad celular. Mecanismo indirecto: el agotamiento de los mecanismos de defensa antioxidante de las células, como consecuencia de los daños causados por los compuestos peroxídicos de los aceites ozonizados, generaría un deficiente control de las especies reactivas del oxígeno (ERO) producidas durante la respiración celular. Estas especies reaccionarían
con las proteínas, los ácidos nucléicos y los lípidos, ocasionando la muerte celular.
Una de las primeras evidencias del daño oxidativo, es la dis- minución de los grupos sulfhidrilo (SH), como consecuen- cia de la disminución de los niveles de glutatión reducido y de la oxidación de proteínas que porten estos grupos. En S. aureus y P. aeruginosa se han descrito importantes reducciones en el contenido de grupos SH, al ser tratadas con aceite de girasol ozonizado.8
En el mecanismo indirecto, es de destacar el papel significativo que juega el hierro al potenciar la formación de radicales hidroxilo. Cuando el hierro no está ligado apro- piadamente, o se encuentra en su forma ferrosa, puede reaccionar con el peróxido de hidrógeno producido durante la respiración celular y producir el radical hidroxilo.10 Las ERO actúan sobre el ADN atacando las bases y los restos de azúcares, produciendo rupturas y uniones cruzadas con otras moléculas, lo que bloquea la replicación.11 Los daños a proteínas, incluyen oxidación de residuos de aminoácidos y grupos SH, modificaciones de grupos prostéticos, entre- cruzamientos proteína-proteína y fragmentación peptídica.12 Los radicales libres pueden atacar directamente a los ácidos grasos insaturados de las membranas, e iniciar la peroxi- dación lipídica. Un efecto primario de este proceso, es la disminución de la fluidez de las membranas, lo que altera las propiedades de las mismas.13 Estudios efectuados con aceite de girasol ozonizado, mostraron una pérdida de la capacidad de la membrana celular de S. aureus, para rete- ner los iones K+ en el citoplasma, un resultado de la posible peroxidación de lípidos de la bicapa.14
El modo de actuar de los aceites ozonizados parece ser esencialmente similar al de otros antimicrobianos uni- versalmente reconocidos como seguros. Estudios llevados a cabo en E. coli y S. aureus, empleando las tres principales clases de antibióticos bactericidas, demostraron que todas originan secuencias de eventos que convergen en la produc- ción de radicales hidroxilo. Al utilizar neutralizadores de radi- cales libres,15 se logró suprimir el efecto bactericida, pero no el efecto bacteriostático. La producción de radicales libres
- no se presentó al emplear antibióticos bacteriostáticos. Esto demuestra la existencia de un mecanismo común de muerte celular, en el cual los daños oxidativos desempeñan el papel principal.
Bases de la toxicidad selectiva Los organismos que muestran sensibilidad a los aceites ozonizados poseen gran diversidad en cuanto a caracteres estructurales y fisiológicos, lo que reduce las características comunes a todos ellos que no son compartidas por las célu- las humanas. Un análisis de estas características sugiere que la mayor resistencia de las células humanas puede deberse a varios factores, entre los cuales destacan tres:
- •Organización de las células en los tejidos animales
- Fortaleza de los mecanismos de defensa antioxi- dante
Compartimentación intracelular.
La forma en que se organizan las células en los tejidos animales les ofrece múltiples ventajas en cuanto a la
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ENF ACTUALIDADES INF MICROBIOL 2013 34 (2): 64-68 protección ante agentes oxidantes. Las vías de adminis- tración empleadas para los aceites ozonizados (tópica y oral), hacen que sea el tejido epitelial el que determine el curso de las interacciones iniciales. La cohesión celular presente en este tejido, la ausencia de vascularización en el mismo, así como la regeneración continua a la que están sometidas sus células, son barreras que dificultan la difusión y limitan el daño causado por un compuesto tóxico que acceda a la superficie o a las cavidades internas del organismo humano. Las células queratinizadas muertas que cubren la piel, actúan como un escudo protector para las células basales ante el daño oxidante. Es de considerar también, que de generarse daños a células vivas del tejido epitelial, estas cuentan con la posibilidad de activación de la apoptosis mediante la vía intrínseca. Daños de conside- ración al ADN o estrés oxidativo, generarían la activación del gen supresor tumoral p53.16
Las células humanas cuentan con diversos mecanis- mos de defensa antioxidante, muchos de los cuales están presentes en la mayoría de los organismos eucariontes y aerobios procariontes. En los mecanismos antioxidantes enzimáticos se encuentran importantes diferencias. Un ejemplo de ello son las selenoproteínas. Estas moléculas contienen en su estructura al aminoácido selenocisteína. Aunque están presentes en los tres tipos de células conoci- das (Archaea, Bacteria y Eucarya), las selenoproteínas están ausentes en las plantas superiores, los hongos y la mayoría de los insectos y nematodos.17 Estos organismos, en su lugar, usan proteínas homólogas que contienen cisteína. Se ha demostrado que las selenoproteínas pueden ser mil veces más efectivas en la catálisis que sus homólogas de cisteína.18 Las selenoproteínas procariotas están involucra- das fundamentalmente en procesos catabólicos y en la utili- zación del selenio para catalizar diversas reacciones Redox,19 mientras que las eucariotas caracterizadas funcionalmente, participan en reacciones anabólicas de oxido-reducción y funcionan como antioxidantes. Esto hace que jueguen un papel medular en el control del balance Redox celular.17 Entre las selenoproteínas presentes en mamíferos que están vinculadas a la defensa antioxidante se encuentran: metionina R-sulfóxido reductasa, tiorredoxina reductasa, glutatión peroxidasa y la selenoproteína H, la cual regula la expresión de genes para la síntesis de glutatión.
Los humanos poseen 25 genes de selenoproteínas. Entre estas últimas destacan por su función antioxidante, cinco formas de glutatión peroxidasas y 3 formas de tio- redoxinas reductasas.20 Sólo una minoría de las glutatión peroxidasas caracterizadas son selenoproteínas. Éstas pre- valecen en mamíferos y otros vertebrados, sólo han sido esporádicamente detectadas en animales inferiores, como los artrópodos y trematodos, excepcionalmente en bacte- rias, y hasta la fecha, no se han reportado en protozoos.21 La glutatión peroxidasa es una enzima más afín al peróxido de hidrógeno que la catalasa, por lo que constituye una mejor fuente de protección contra bajos niveles de estrés oxidativo. Además, puede reaccionar de manera efectiva con lípidos y otros hidroperóxidos orgánicos,22 los cuales son muy abundantes en los aceites ozonizados.
La oxidación de metionina a metionina sulfóxido por agentes oxidantes, es un proceso reversible gracias a la
actividad de la enzima metionina R-sulfóxido reductasa. Los residuos de metionina se encuentran con mucha frecuen- cia situados en la superficie de las proteínas, lo que sugiere que podrían ser utilizados para evitar el daño oxidativo a otros residuos esenciales.23 Al contar los mamíferos con selenoproteínas que realizan esta función, es de esperar una mayor eficacia en relación a la reducción catalizada por las homólogas de cisteína que portan muchos microorga- nismos. Otra importante diferencia entre los mecanismos enzimáticos antioxidantes entre eucariontes y procarion- tes, se encuentra en las peroxirredoxinas. Estas enzimas utilizan residuos de cisteína para reducir peróxidos como Hde 2Otener 2, peroxinitritos e hidroperóxidos orgánicos.24 A pesar una baja eficiencia catalítica en comparación con las glutatión peroxidasas y las catalasas,25 las peroxirredoxi- nas juegan un papel importante en la detoxificación porque son muy abundantes en las células. Algunas peroxirredoxi- nas eucariotas, a diferencia de las procariotas, tienen una alta susceptibilidad a ser inactivadas por la sobre-oxidación al grupo sulfínico del grupo tiol de la cisteína que reacciona con el peróxido. Esta inactivación es reversible ya que se han identificado enzimas que son capaces de reducir este grupo sulfínico.26 La inactivación temporal de las peroxirre- doxinas es beneficiosa para las células eucariotas, las cuales inactivación utilizan de la el actividad H2O2 como peroxidasa molécula permite señalizadora.un aumento 27 La
temporal nentes de Redox- H2Osensibles 2, y por lo tanto, de las la activación de compo- rutas de señalización que originan respuestas globales a estrés.28
El elevado grado de compartimentación celular presente en las células eucariotas, constituye también una herramienta para la defensa ante los daños oxidativos. La separación entre núcleo y citoplasma, así como la exis- tencia de un transporte nuclear, no sólo limita el acceso al ADN de compuestos tóxicos provenientes del citoplasma, sino además permite la acción de un mecanismo de regu- lación ausente en procariotas. Éste se basa en que cier- tos factores de transcripción se encuentran retenidos en el citoplasma y sólo en respuesta a una señal específica se acumulan en el núcleo donde activan la transcripción de sus genes diana. Algunos genes de respuesta a estrés oxidativo sufren una regulación de este tipo, en función de la localización subcelular de su factor de transcripción, como es el caso de aquellos activados por el factor nuclear kappa B.29 Otros elementos diferenciales asociados a la compartimentación celular, son la ubicación de las enzi- mas involucradas en la respiración celular y los complejos membranosos citoplasmáticos. En la célula procariota las enzimas participantes en la respiración celular se encuen- tran ancladas a la cara interna de la membrana celular. Esta ubicación las hace muy sensibles al ataque de agentes oxidantes provenientes del exterior, lo que haría inoperante un proceso vital. La célula eucariota cuenta con un vasto complejo membranoso en su citoplasma, que interconecta varios organelos entre sí y con el núcleo celular. La ausencia de este sistema en la célula procariota, facilita la difusión de compuestos tóxicos que hayan accedido al citoplasma, los cuales tendrán mayor probabilidad de interactuar con las biomoléculas sensibles. Por su parte, la célula eucariota al contar con este complejo membranoso, tiene la capa-
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Autor y cols. LOS ACEITES OZONIZADOS EN EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS
cidad de ejercer un mejor control sobre la generación de las ERO y sobre el daño que estas realizan, al concentrar un mayor número de enzimas y moléculas antioxidantes en el interior de los organelos donde más se producen estas especies tóxicas, como son las mitocondrias y los
peroxisomas. En el cuadro 1 se resumen algunas de las diferencias existentes entre las células de los mamíferos y las células de bacterias y hongos, que pueden explicar la toxicidad selectiva de los aceites ozonizados.
Cuadro 1 Características estructurales y fisiológicas que condicionan diferencias en la sensibilidad a compuestos oxidantes
Características Mamíferos Bacterias Hongos
Tejidos protectores Epitelial Ausentes Ausentes
Selenoproteínas
Participan en procesos anabólicos y actúan como antioxidantes
Fundamentalmente orientadas a procesos catabólicos
Ausentes
Susceptibilidad de las peroxirredoxinas a la
inactivación por oxidación Alta Baja Alta
Membrana nuclear Presente Ausente Presente
Complejos membranosos citoplasmáticos Abundantes Generalmente ausentes Abundantes
Ubicación de los complejos de transporte de electrones
Mitocondrias Membrana celular Mitocondrias
Perspectivas y potencialidades de los aceites ozonizados La literatura científica reporta una gran diversidad de apli- caciones de los aceites ozonizados en el tratamiento de las enfermedades infecciosas. Destacan entre ellas, las rela- cionadas con onicomicosis, dermatofitosis, impétigo, acné, úlceras, lesiones herpéticas y giardiasis.30 Una de las aplica- ciones más novedosas, ha sido el tratamiento de la conjunti- vitis hemorrágica viral con aceite de girasol ozonizado, donde se obtuvieron altos índices de efectividad y bajos niveles de efectos adversos.31 En el campo de la estomatología, los aceites ozonizados han demostrado eficacia terapéutica en el tratamiento de alveolitis, gingivoestomatitis herpética, alveolitis, conductos radiculares infectados y periodontitis crónica.5 Entre las conquistas de la terapia con aceites ozo- nizados, se encuentran los registros y licencias sanitarias de operaciones farmacéuticas otorgadas al OLEOZON, por el Centro para el Control Estatal de Medicamentos, Equipos y Dispositivos Médicos (CECMED) de la República de Cuba, un organismo reconocido por la Organización Mundial de la Salud.30 El OLEOZON oral ha sido registrado como medi- camento para el tratamiento de la giardiasis y esquemas de aplicación similares pudieran ofrecer resultados favorables en otras patologías del tracto digestivo, como las úlceras causa-
das por H. pylori. El amplio espectro de acción de los aceites ozonizados, permitiría extender sus usos en el tratamiento de otras afecciones, especialmente aquellas de localización en las mucosas, como queratoconjuntivitis, amigdalitis, con- dilomas, tricomoniasis, vaginitis, vaginosis, uretritis y otitis bacterianas, actinomicosis y linfogranuloma venéreo.
El fenómeno de la resistencia a fármacos se ve favorecido por el uso extensivo de los antibióticos. El com- binar aceites ozonizados con antibióticos bactericidas que generan daño oxidativo, produciría una mayor potenciación del efecto antimicrobiano, a la vez que reduciría la posi- bilidad de que los microorganismos lograran resistencia al fármaco. Este sinergismo también permitiría emplear antibióticos a concentraciones terapéuticas menores, algo muy conveniente en aquellos que muestran un grado de toxicidad considerable, como es el caso de los aminoglu- cósidos. Se espera que en los próximos años el espectro de aplicaciones clínicas de los aceites ozonizados siga creciendo. Se requerirá con mayor urgencia de nuevos estudios que permitan ampliar el conocimiento sobre las formas en que interactúan éstos con los microorganismos y las células humanas. Demostrar las bases bioquímicas en que se sustenta su efectividad, favorecerá su aceptación y uso como agentes quimioterapéuticos.
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